USP 85/ YYT0616/ GBT14233.2/ EN 455-3/ 中国药典-内毒素干扰试验
试验目的
确定供试品在多大的稀释倍数或浓度下对内毒素和鲎试剂的反应不存在干扰作用,为能否使用细菌内毒素检查法提供依据。
当进行新药的内毒素检查试验前,或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时,须进行干扰试验。
当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时,须进行干扰试验。
1、将无可检测到内毒素的供试品进行一系列倍数的稀释,但最大的稀释倍数不得超过MVD=CL/λ0.03(0.03EU/ml为现今我国市售鲎试剂的最高灵敏度)。
2、使用鲎试剂对每一稀释倍数进行检验。每一稀释倍数下做2支供试品管和2支供试品阳性对照(即该浓度的供试品稀释液将内毒素标准品制成2λ浓度)。另取2支细菌内毒素检查用水作阴性对照,2支加入2λ浓度的内毒素标准溶液作为阳性对照。
例 制备稀释倍数为4的供试品阳性对照溶液:0.3ml4.0λEU/ml的内毒素标准液+0.3ml稀释倍数为2的供试品稀释液=0.6ml含2λEU/ml内毒素标准液的稀释倍数为4的供试品稀释液
3、保温60±2分钟,观察并记录结果。
4、当阴性对照为阴性,阳性对照为阳性时,实验有效。当系列浓度中出现供试品溶液2管为阴性,供试品阳性对照2管为阳性时,认为供试品在该浓度下不干扰实验,此稀释倍数即为最小不干扰稀释倍数。即可选择该稀释倍数进行正式干扰实验。
5、当系列浓度中所有浓度的供试品管都不为阴性,或供试品阳性对照不为阳性时,说明供试品对内毒素与鲎试剂的反应存在干扰,则应对供试品进行更大稀释倍数(不得超过MVD=CL/λ0.03 ),或通过其他适宜的方法(如过滤、中和、透析或加热处理等)排除干扰。
6、当供试品的内毒素限值单位为EU/mg或EU/U活性单位时,应将最小不干扰稀释倍数换算成最大不干扰浓度(即稀释倍数下溶液的浓度),以mg/ml或活性单位/ml表示。